3、固相高效色谱分析条件
Agilent5HC-C18（2）（4.6×250mm，液相5μm）色谱柱，色谱时测进样量20μL，法同流速1.0mL/min，定糕点中的研柱温35℃，种添以甲醇作为流动相A，加剂究以0.02moI/L乙酸铵溶液为流动相B，固相高效梯度洗脱，液相洗脱条件见表1。色谱时测使用二极管阵列检测器，法同光谱范围190～700nm；光谱步进值为2.0nm，定糕点中的研光谱采集模式。种添以保留时间及光谱图定性，加剂究在230nm和625nm波长下进行检测，固相高效峰面积外标法定量。
二、结果与讨论
1、色谱条件的优化
本试验比较乙腈-0.02mol/L乙酸铵和甲醇-0.02mol/L乙酸铵按表1梯度进行洗脱时，发现新红与苯甲酸，靛蓝与脱氢乙酸分离度达不到1.5的要求，原因可能有几点：首先，乙腈洗脱能力比甲醇强，在UV波长较短的色谱分析上具有较高灵敏度，且色谱级的乙腈是吸收能力比较小的有机溶剂，故乙腈过强的洗脱能力以及乙腈特有的性质都会造成出峰时间靠前的目标物和杂质峰或者相邻的峰分不开；其次，苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、纳他霉素极性相较胭脂红、日落黄、诱惑红极性偏强，采用乙腈阶梯式梯度洗脱，出峰速度快，无法控制基质基线干扰；再者，糕点中的基质大多数为无机盐、蛋白质、糖类等，乙腈洗脱不能有效避免这些基质对目标物的干扰，试验中也通过调整梯度洗脱的比例，但是无论如何调整仍然无法将13种目标物完全分离，然而采用甲醇洗脱能够有效避免乙腈存在的这些问题，结果见图1。本次试验还选择了甲醇一0.02mol/L乙酸铵与甲醇-0.02mol/L磷酸二氢铵溶液进行梯度洗脱，13种食品添加剂均为极性物质，与水均能互溶，采用0.02mol/L磷酸二氢铵对防腐剂的分离没有影响，但是这个水系的流动相对色谱分离影响较大，大部分色谱均不能有效洗脱，结果见图2，综合考虑，本试验最终选择甲醇一0.02mol/L乙酸铵按表1程序进行分离。
2、样品前处理优化
（1）蛋白沉淀剂的选择
人工合成色素与防腐剂、甜味剂的前处理方法不同，参考相关文献，本次试验针对糕点中的基质，选择水系蛋白沉淀剂，即106g/L亚铁氰化钾和219g/L乙酸锌溶液进行处理，这两种水系蛋白沉淀剂均为中性盐，中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质是一种盐析反应，由于蛋白质是一种胶体，乙酸锌与亚铁氰化钾反应生成的氰亚铁酸锌沉淀能够挟走或吸附干扰物质，且这两种中性盐除蛋白能力强，同时高浓度的盐离子水化能力很强，能够将蛋白质分子的水化层夺取，鉴于各种蛋白质分子颗粒大小不同，故盐析所需的盐浓度也不同，本次试验经过反复测试，最终采用106g/L亚铁氰化钾溶液和219g/L乙酸锌处理样品中蛋白质效果最佳。
（2）固相萃取柱的选择
本次试验通过样品加标回收进行考察，分别称取阴性样品6份，每份2.59，各精密加入标准混合储备液1.0mL，其余称取粉碎均匀的糕点样品2.5g置50mL离心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亚铁氰化钾溶液和5mL219g/L乙酸锌溶液，涡旋10min后，加水定容至50mL，经10000r/min冷冻离心10min后取出，量取上清液5mL过QasisWAX固相萃取小柱（预先经3mL甲醇以及3mL水活化），弃去流出液，依次用6mL2％甲酸和6mL纯化水清洗，再用5％氨化甲醇洗脱并收集于15mL离心管中，在40℃水浴中氮吹至近干后取出放置室温，用5mL水复溶残渣，过0.45μmGHP微孔滤膜后，待测。
结果见表2，从结果可以看出，WatersOasisWAX固相萃取小柱回收率最高，对本次试验的13种食品添加剂富集比较好，WatersOasisHLB固相萃取小柱和WatersOasisMCX固相萃取小柱回收率次之，原因可能是，WatersOasisWAX固相萃取小柱特点为混合型弱阴离子交换反相吸附剂，具有弱阴离子交换和非极性疏水双重作用的混合吸附剂，对强酸性化合物具有高的选择性和灵敏度，含弱碱性的胺基功能基团，适用于从碱性或中性物质中分离纯化酸性物质，可用于强酸性化合物的处理，本次试验的13种添加剂均为水溶性化合物，采用WAX进行富集，2％甲酸清洗能够将样品中离子状态的杂质清洗去除，再用5％氨化甲醇将富集在固相萃取小柱分子状态的添加剂进行离子化洗脱下来；WatersOasisHLB内的吸附剂是通过一个“特殊的极性捕获基团”来增加对极性物质的保留提供很好的水浸润性，用于酸性，中性和碱性化合物的通用型吸附剂，这种性质用于分析人工合成色素极好的，但是这个小柱对防腐剂中的纳他霉素和富马酸二甲酯的保留富集效果较差，原因可能是HLB内填料是亲脂性化合物，而纳他霉素和富马酸-ep酯是亲水性的，WatersOasisMCX固相萃取小柱是混合型阳离子交换反相吸附剂，对碱性化合物具有高的选择性和灵敏度，MCX小柱对部分色素和防腐剂的富集效果也比较差，不能同时对13种成分进行分析，故本次试验选择WatersOasisWAX固相萃取小柱进行。
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完善补贴政策启动内需市场,行业资讯维生素 E 与生命早期生长发育及疾病相关性研究进展江苏淮安发布2021年网络市场监管专项行动典型案例玻璃货物上市 尚无确切时间表,行业资讯中国玻璃器皿之都花落晋中祁县,行业资讯分布式光伏发电带来电力系统管理变革,行业资讯郑商所今日测试交易系统 玻璃货物上市进入倒计时,行业资讯买衬衣 看哆咪印像就够了 利落时尚“民用化”成光伏市场新关键词,行业资讯中国光伏企业“深、准、特”三面布局赢先机,行业资讯福建厦门：强化春节前公共场所特种设备安全检验光伏“双反”关闭出口主通道 海南太阳能企业减产,行业资讯宝岛当局支持光伏企业开拓美泰两国市场,行业资讯玻璃货物上市临近 交易门槛低有望受热捧,行业资讯7批次建筑用夹层玻璃被曝不合格,行业资讯江西新干打造玻璃灯饰产业生产基地,行业资讯可弯曲电视？苹果获曲面玻璃工艺专利,行业资讯浮法玻璃售价趋势经济权益凭证周报,行业资讯绿色化学的若干衡量指标（二）邵阳市部署平板显示触摸屏超薄超强电子玻璃项目工作,行业资讯浙江投入资金10亿元创新建设嘉兴集成光伏产业园,行业资讯浙江景宁：“双拥引领”打造放心消费美丽乡村光伏发电新政有望明年显现效应,行业资讯超声微波协同萃取桃胶多糖的工艺研究（二）“铁拳”行动｜护航百姓衣食住行 重庆查办案件上万件福建通报第二批反不正当竞争执法典型案例 涉及教育培训、房地产等领域欧洲玻璃陶瓷器特展在甘肃省博物馆开展 ,行业资讯玻璃偏强振荡将是主旋律,市场研究福建龙岩：开展春节前中心城区市场价格检查大部分国家前20玻璃幕墙企业去年总销售额下跌6%,国际动态国内较早的25年期光伏保险产品出炉,行业资讯江西发布消费提示：乳品选购有讲究探究水质环境微生物检测的质量控制国内光伏企业加快自救速度,行业资讯调味品中真菌毒素污染与防治中国相关部门全力支持太阳能行业,行业资讯2012年中国十大玻璃品牌评选之佛山市福尔斯特机电参评资料,企业新闻女性备孕吃什么提高受孕率（营养专家推荐备孕饮食）玻璃纤维“织”出省优品牌,行业资讯“救市”政策将出台 欲破解光伏应用困局 ,行业资讯中国光伏企业进军海外光伏电站市场,行业资讯离子色谱法测定碳酸饮料中5种添加剂的方法研究（一）香港一只贵妃蚌样品中检出兽药氯霉素光伏大战只是开篇 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